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全自動(dòng)酶標(biāo)儀的功能介紹及正確使用方法
日期：2024-09-18 13:51
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摘要：全自動(dòng)酶標(biāo)儀具有自動(dòng)洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)人員在使用全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定操作時(shí)，有時(shí)難免會(huì)對(duì)酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)準(zhǔn)混亂，甚至對(duì)酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生誤解。如酶標(biāo)儀的陽(yáng)性率較肉眼測(cè)定明顯提高。
1、全自動(dòng)酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測(cè)，一般為硅光管或光纖。除了測(cè)量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個(gè)參考通道，每次測(cè)量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線(xiàn)性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測(cè)量的準(zhǔn)確...
全自動(dòng)酶標(biāo)儀具有自動(dòng)洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)人員在使用全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定操作時(shí)，有時(shí)難免會(huì)對(duì)酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)準(zhǔn)混亂，甚至對(duì)酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生誤解。如酶標(biāo)儀的陽(yáng)性率較肉眼測(cè)定明顯提高。
1、全自動(dòng)酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測(cè)，一般為硅光管或光纖。除了測(cè)量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個(gè)參考通道，每次測(cè)量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線(xiàn)性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測(cè)量的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到測(cè)量通道的均勻性。單通道可以避免不同通道造成的差異。
2、 全自動(dòng)酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)在400-750nm或800nm之間，可以滿(mǎn)足ELISA的要求。目前國(guó)內(nèi)常用的ELISA試劑盒是辣根過(guò)氧化物酶（HRP），底物通常是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD）。在過(guò)氧化氫存在下，酶被HRP氧化成2,2,2，二甲基偶氮苯（DAB）和苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有較大吸收。當(dāng)pH值降至l0時(shí)，較大吸收波長(zhǎng)移到492nm，摩爾消光系數(shù)變大，顏色加深，因此通常用硫酸或鹽酸等強(qiáng)酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物在450nm波長(zhǎng)處具有較大的消光系數(shù)。如果HRP小，h:o:TMB過(guò)高，就會(huì)形成藍(lán)色的陽(yáng)離子根。降低pH值可使藍(lán)色陽(yáng)離子根轉(zhuǎn)化為黃色苯醌，以硫酸為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm是ELISA中常用的兩種方法。所有酶標(biāo)儀均配有放置過(guò)濾器的自動(dòng)轉(zhuǎn)換部件，可同時(shí)安裝6-8個(gè)過(guò)濾器。所有濾光片應(yīng)包括上述兩個(gè)波長(zhǎng)。一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器用490nm濾光片代替492nm濾光片，影響不大。除這兩種基本濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色法的需要，還應(yīng)設(shè)有620nm或630nm或650nm和405nm濾光片，其他濾光片可根據(jù)自身需要選擇。有時(shí)，一些實(shí)驗(yàn)室需要使用酶標(biāo)儀進(jìn)行微量生化測(cè)定，因此酶標(biāo)儀廠家對(duì)酶標(biāo)儀的紫外檢測(cè)功能進(jìn)行了擴(kuò)展，需要340nm波長(zhǎng)的濾光片。此時(shí)酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)范圍為340-750nm或800nm。
全自動(dòng)酶標(biāo)儀具有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能。有時(shí)，用戶(hù)不知道在什么情況下使用單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂“單波長(zhǎng)”，是用顯色裝置吸收較大的波長(zhǎng)，即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；用“雙波長(zhǎng)”與顯色裝置較大吸收波長(zhǎng)450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定，用對(duì)特定顯色不敏感的波長(zhǎng)630nm進(jìn)行測(cè)定。酶標(biāo)打印的終端吸光度是它們之間的差值。在630nm處獲得的吸光度是非特異性的，它是由指紋、灰塵、污垢等的吸收引起的。因此，在ELISA比色法中，建議使用雙波長(zhǎng)，不需要空白孔。
3、 測(cè)定的吸光度范圍一般為全自動(dòng)酶標(biāo)儀的吸光度。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的測(cè)定要求在1.5～1之間，早期酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度一般在1.5～1之間。在12.5之間，但現(xiàn)在基本上已經(jīng)擴(kuò)大到3.5以上，并能保持良好的精度和線(xiàn)性。例如，labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度為0-3.5，MultiScan ascent的吸光度為0-4.0，線(xiàn)性誤差不大于0-4.0± 2.0%，在吸光度0.3-3.0范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于± 0.2%; 在3.0～4.0abs范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于0.2%。因此，酶標(biāo)儀的吸光度范圍無(wú)需刻意追求，主要取決于吸光度在一定范圍內(nèi)的線(xiàn)性和精密度。
4、 酶標(biāo)檢測(cè)速度是指完成比色測(cè)定所需的時(shí)間
我司專(zhuān)注于生命科學(xué)儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售，主要產(chǎn)品有超微量分光光度計(jì)，酶標(biāo)板離心機(jī)，微孔板振蕩器等，歡迎廣大客戶(hù)前來(lái)咨詢(xún)！
1、全自動(dòng)酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測(cè)，一般為硅光管或光纖。除了測(cè)量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個(gè)參考通道，每次測(cè)量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線(xiàn)性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測(cè)量的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到測(cè)量通道的均勻性。單通道可以避免不同通道造成的差異。
2、 全自動(dòng)酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)在400-750nm或800nm之間，可以滿(mǎn)足ELISA的要求。目前國(guó)內(nèi)常用的ELISA試劑盒是辣根過(guò)氧化物酶（HRP），底物通常是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD）。在過(guò)氧化氫存在下，酶被HRP氧化成2,2,2，二甲基偶氮苯（DAB）和苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有較大吸收。當(dāng)pH值降至l0時(shí)，較大吸收波長(zhǎng)移到492nm，摩爾消光系數(shù)變大，顏色加深，因此通常用硫酸或鹽酸等強(qiáng)酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物在450nm波長(zhǎng)處具有較大的消光系數(shù)。如果HRP小，h:o:TMB過(guò)高，就會(huì)形成藍(lán)色的陽(yáng)離子根。降低pH值可使藍(lán)色陽(yáng)離子根轉(zhuǎn)化為黃色苯醌，以硫酸為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm是ELISA中常用的兩種方法。所有酶標(biāo)儀均配有放置過(guò)濾器的自動(dòng)轉(zhuǎn)換部件，可同時(shí)安裝6-8個(gè)過(guò)濾器。所有濾光片應(yīng)包括上述兩個(gè)波長(zhǎng)。一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器用490nm濾光片代替492nm濾光片，影響不大。除這兩種基本濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色法的需要，還應(yīng)設(shè)有620nm或630nm或650nm和405nm濾光片，其他濾光片可根據(jù)自身需要選擇。有時(shí)，一些實(shí)驗(yàn)室需要使用酶標(biāo)儀進(jìn)行微量生化測(cè)定，因此酶標(biāo)儀廠家對(duì)酶標(biāo)儀的紫外檢測(cè)功能進(jìn)行了擴(kuò)展，需要340nm波長(zhǎng)的濾光片。此時(shí)酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)范圍為340-750nm或800nm。
全自動(dòng)酶標(biāo)儀具有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能。有時(shí)，用戶(hù)不知道在什么情況下使用單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂“單波長(zhǎng)”，是用顯色裝置吸收較大的波長(zhǎng)，即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；用“雙波長(zhǎng)”與顯色裝置較大吸收波長(zhǎng)450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定，用對(duì)特定顯色不敏感的波長(zhǎng)630nm進(jìn)行測(cè)定。酶標(biāo)打印的終端吸光度是它們之間的差值。在630nm處獲得的吸光度是非特異性的，它是由指紋、灰塵、污垢等的吸收引起的。因此，在ELISA比色法中，建議使用雙波長(zhǎng)，不需要空白孔。
3、 測(cè)定的吸光度范圍一般為全自動(dòng)酶標(biāo)儀的吸光度。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的測(cè)定要求在1.5～1之間，早期酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度一般在1.5～1之間。在12.5之間，但現(xiàn)在基本上已經(jīng)擴(kuò)大到3.5以上，并能保持良好的精度和線(xiàn)性。例如，labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度為0-3.5，MultiScan ascent的吸光度為0-4.0，線(xiàn)性誤差不大于0-4.0± 2.0%，在吸光度0.3-3.0范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于± 0.2%; 在3.0～4.0abs范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于0.2%。因此，酶標(biāo)儀的吸光度范圍無(wú)需刻意追求，主要取決于吸光度在一定范圍內(nèi)的線(xiàn)性和精密度。
4、 酶標(biāo)檢測(cè)速度是指完成比色測(cè)定所需的時(shí)間
我司專(zhuān)注于生命科學(xué)儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售，主要產(chǎn)品有超微量分光光度計(jì)，酶標(biāo)板離心機(jī)，微孔板振蕩器等，歡迎廣大客戶(hù)前來(lái)咨詢(xún)！